О. А.
Михайлова, П. М. Зубов
Институт проблем криобиологии и
криомедицины НАН Украины, Харьков
E-mail:
Данный адрес e-mail защищен от спам-ботов, Вам необходимо включить Javascript для его просмотра.
,
Данный адрес e-mail защищен от спам-ботов, Вам необходимо включить Javascript для его просмотра.
Исследования последних лет показали, что гемопоэтические стволовые
клетки (ГСК) способны к трансдифференцировке за границы линий тканей. Это дает
возможность использования их в тканевой/органной регенерации и является
перспективным для геронтологии. Одним из наиболее перспективных источников
получения ГСК является кордовая кровь (КК). Для использования данных клеток в
медицинской практике возникает необходимость их долгосрочного хранения в
замороженном состоянии. Процесс подготовки препаратов ГСК к процедуре
криоконсервирования состоит из нескольких этапов: забор крови, выделение
фракции ядросодержащих клеток (ЯСК), в состав которые входят ГСК, обработка их
криопротектором и замораживание в жидком азоте. Необходимо отметить, что
состояние ЯСК после процедуры выделения из цельной КК во многом предопределяет
результаты замораживания-отогрева, поскольку дестабилизация клеток на данном
этапе может приводить к нарушению их морфологических и метаболических свойств,
что в дальнейшем может стать причиной гибели клеток. Одним из результатов
подобных нарушений может быть накопление высоких концентраций активных форм
кислорода (АФК), которые инициируют гибель клеток.
В связи с этим, цельюисследования была оценка продукции АФК ЯСК в зависимости от методов выделения их
из цельной КК. Выделение ЯСК проводили несколькими методами: в градиенте
плотности фиколл-верографина, седиментация в полиглюкине и по разработанному
нами методу двухэтапного центрифугирования. Иммунофенотипирование ЯСК и
содержание в них АФК, с использованием дихлорфлуоресцин диацетата (DCFH2–DA),
оценивали методом проточной цитофлуориметрии.
Выделение ЯСК методом
двухэтапного центрифугирования вызывал незначительную активацию выработки АФК.
При использовании полиглюкина данный параметр возрастал, но не имел достоверно
значимых отличий от контроля. Наибольшая продукция АФК наблюдалась при
выделении ЯСК с помощью фиколла. Эта активация связана с влиянием процесса
выделения на метаболизм клеток, и повышение уровня АФК носит физиологический
характер для активации клеточных процессов, компенсирующих изменение
физико-химического состава среды, в которую помещают клетки при выделении.
Необходимо отметить,
что получаемые после выделения концентраты ЯСК являются гетерогенными и
включают в себя лимфоцитарную, моноцитарную и гранулоцитарную фракции, для
которых отмечается индивидуальная реакция в отношении продукции АФК в
зависимости от способа выделения. Так, для лимфоцитов благоприятным является
использование для выделения полиглюкина, для гранулоцитов – метод двухэтапного
центрифугирования. Моноциты являются наиболее активно вырабатывающими АФК при
любом способе выделения ЯСК КК.
Таким образом, было показано, что после выделения
ЯСК, в том числе и ГСК, из цельной КК методом двухэтапного центрифугирования и
с использованием полиглюкина продукция АФК носит физиологический характер.